用于基因治疗的临床级逆转录病毒载体生产已经应用于一些病症，这种病毒载体修饰体细胞需要具有基因稳定性。γ逆转录病毒载体是首次应用于治疗严重联合免疫缺陷患者。

如今，基于更加复杂的慢病毒设计的其他逆转录病毒基因转导载体，如人免疫缺陷病毒（HIV）-1，已经在临床上用于治疗遗传性疾病或HIV感染。

慢病毒载体（LV）提供了许多有价值的特性，包括稳定的将基因整合到宿主基因组中，通过VSV-G假型分型将遗传信息转移到分裂和非分裂细胞以及广泛的组织趋向性能力。

目前正在临床试验中用于治疗罕见和更频密的遗传和后天疾病，以及CAR-T细胞癌症治疗。慢病毒载体（LV）是基因和细胞治疗应用的关键工具。目前如何为临床应用提供足够数量的载体仍是一个难题。

采用贴壁细胞大规模生产慢病毒 

大多数大规模生产都是小规模生产的直接放大，即通过增加培养/生产单元来实现。生产基本上采用大量的多层培养系统（Cell Factories（CF）（CF-10））或者Cell Stacks（CS）（如图）。

耐思10层细胞工厂（BioFactory?）

分不同盖型

因为易于操作，10叠层装置（CS-10）是首选，虽然原则上40叠层装置同样也可以用，但是因为它重量增加的原因所以需要特殊的处理系统。此外，每层平板的气体交换及培养基层不可能一致，因此用显微镜控制40叠层装置细胞的生长很困难。生产要么采用放在层流工作台的开放模式，要么采用半封闭模式，后者对操作人员、环境及终产品的安全性更高。

收获是通过简单的培养基置换完成的，在某些情况下，通过增加收获次数来提高最终慢病毒的质量。然而，在临床前及临床级大规模生产时，频繁收获是不现实的，因此在大多数时候只是收获1-3次。

根据10叠层培养设备的数量及收获次数的多少，可采用10-24个CF-10设备一次生产周期可以收获的体积介于20-52升之间。

在贴壁培养系统中，培养上清可以间隔一天收获两次，这是一个提高成本效益的好方法。在悬浮培养系统中，这种方法很难实现。

采用悬浮培养生产慢病毒

 虽然转染贴壁细胞是生产慢病毒的金标准方法，但是这个方法在扩大规模上受限。对工业化生产来说，在大的生物反应器中培养细胞通常是最便捷的方式。 

在生物反应器中生产需要对悬浮的生产细胞扩大培养。多个用于生产慢病毒的细胞系(293T、293FT、293SF-3F6)被报道易于在化学成分限定的培养基(Freestyle 293 and F17, Invitrogen, Carlsbad, CA; HyQSFM4TransFx293, Hyclone, Logan, UT)中适应悬浮培养。这些细胞可以在没有为载体的情况下迅速悬浮生长，这使得它们的培养和扩大比贴壁培养的细胞容易很多。此外，培养基中没有牛血清及其他动物来源的组分是临床生产最合适的情况，它可以降低被外源物质污染的风险。

在悬浮培养模式下，细胞可以通过不同的容器进行扩大：摇瓶、玻璃生物反应器、不锈钢生物反应器、培养袋及一次性搅拌容器。有报道采用HEK293T细胞进行扩增、转染、慢病毒生产可以用一次性的生物反应器实现50L的规模。

耐思摇瓶系列（容量：125mL、250mL、500mL、1000mL）

适用于培养悬浮细胞

利用悬浮细胞瞬时转染大规模生产慢病毒是可行的，并且显示出良好的产量。但是，在转移到工业生产之前，该技术还需要进一步完善。优化的主要瓶颈是转染过程本身，它需要大量质粒DNA，从而使生产过程极其昂贵。一种工业友好、减少DNA的消耗、提高生产细胞的百分比的转染技术是使这一过程在未来工业中有利可图的关键因素。