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实验时刻
软琼脂克隆实验
软琼脂克隆形成又名非锚定依赖性生长实验(Anehorage-independentassay），利用软琼脂为培养介质，使细胞在悬浮状态下生长。
软琼脂克隆形成实验方法简单，适用于贴壁生长的细胞。
细胞克隆形成率表示接种细胞后贴壁的细胞成活并形成克隆的数量，主要反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。
Part 01.
实验材料
Part 02.
实验操作流程
常见问题与解答
A：细胞接种密度与最终实验结果密切相关，若细胞太多，形成克隆数目太多，处理结果时数克隆不仅容易出错，而且图片很难看（下图左）。细胞太少，不能形成克隆。如下图所示：
上图我们看到3株癌细胞在6孔板克隆形成图片，第一个明显铺板细胞太密集，导致难以统计数据；中间那个正好，最后面那个细胞数量偏少，且细胞铺板不均匀。因此，为了获得美观的图片和准确的数据，第一次实验最好设置细胞接种梯度，如500-1000-2000-5000个/孔挑选出最合适的接种密度。细胞在进行克隆形成实验时要求有95%以上的分散度，否则结果的准确度会受到很大影响；另外注意细胞计数时建议多计数几次。
A：并非每种细胞都可以形成克隆，克隆形成率与细胞本身增殖能力有关。还与接种细胞密度，加入培养液的体积、血清浓度有关。因该实验处理时间较长，应给细胞多加培养基，如每孔4ml，或者3天更换一次培养基，以供给细胞充足的营养。
END
